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寧波歐曼生物科技有限公司
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X-Gal
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X-Gal
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X-Gal
X-Gal也稱5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside,X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的顯色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下會產生藍色產物。常用於β-半乳糖苷酶的原位染色檢測以及藍白斑篩選。
分子式為C14H15BrClNO6,分子量為408.63,CAS Number 7240-90-6。
X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解後呈藍色。基於這個特點,pUC系列載體DNA(或其他帶有lacZ 基因載體DNA)以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體載體DNA進行轉染時,如果在平板培養基中加入X–Gal和IPTG,由於β–半乳糖苷酶的α–互補性,可以根據是否呈現白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體。
使用方法 :
首先把X-Gal配制成20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(-20℃避光保存),然後在100 ml的瓊脂培養基中,加入200 μl的上述溶液、100 μl的IPTG(24 mg/ml)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成X-Gal、IPTG、Amp平板培養基。當DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然後轉化至lacZ缺失細胞中後,塗布上述的X–Gal、IPTG、Amp平板培養基,可根據長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
註意事項 :
◆ 培養噬菌體時,Top agar中的添加量為:50 μl/3 ml(20mg/ml)。
◆ 含有X-Gal的培養基4℃避光保存,須在1~2周內使用。
IPTG
IPTG
誘導原理
作用
中文品名: 異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
商品名稱: Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside
英文簡稱: IPTG
產品別名: Isopropyl β-D-Thiogalactoside
通用CAS : 367-93-1
產品純度: Sigma ≥99%, Merck ≥98% ,INALCO≥99%
產品性狀: 白色或白色粉末,溶於水後呈清亮無色液體
分 子 式: C9H18O5S
分 子 量: 238.30
保存溫度: 2-8°C冷藏保存 ,配制好後保存於-20°C,室溫可放置一個月
主要作用:異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用
IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導物質。基於這個特性,當pUC系列的載體DNA(或其他帶有lacZ 基因載體DNA)以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體的載體DNA進行轉染時,如果在平板培養基中加入X–Gal和IPTG,由於β–半乳糖苷酶的α–互補性,可以根據是否呈現白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體。此外,它還可以作為具有lac或tac等啟動子的表達載體的表達誘導物使用。
RNA聚合酶與P序列結 合,抑制轉錄起動。當有乳糖存在時,lac操縱子(元)即可被誘導。在這個操縱子(元)體系中,真正的誘導劑並非乳糖本身。乳糖進入細胞,經b-半乳糖苷 酶催化,轉變為半乳糖。後者作為一種誘導劑分子結合阻遏蛋白,使蛋白構象變化,導致阻遏蛋白與O序列解離、發生轉錄。異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一 種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。
二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養基。
當DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然後轉化至lacZ缺失細胞中後,塗布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養基,可根據長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
作用
誘導外源基因的表達,普遍應用於原核表達系統,使其表達量增高,產物穩定,具有易鑒定,易純化的優點。
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