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寧波歐曼生物科技有限公司
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異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
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異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
IPTG
IPTG 中文品名: 異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷 商品名稱: Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside 英文簡稱: IPTG 產品別名: Isopropyl β-D-Thiogalactoside 通用CAS : 367-93-1 產品純度: Sigma ≥99%, Merck ≥98% ,INALCO≥99% 產品性狀: 白色或白色粉末,溶於水後呈清亮無色液體 分 子 式: C9H18O5S 分 子 量: 238.30 保存溫度: 2-8°C冷藏保存,配制好後保存於-20°C,室溫可放置一個月 主要作用:異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。 IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導物質。基於這個特性,當pUC系列的載體DNA(或其他帶有lacZ 基因載體DNA)以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體的載體DNA進行轉染時,如果在平板培養基中加入X–gal和IPTG,由於β–半乳糖苷酶的α–互補性,可以根據是否呈現白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體。此外,它還可以作為具有lac或tac等啟動子的表達載體的表達誘導物使用。編輯本段誘導原理首先
E.coli的乳糖操縱子(元)含Z、Y及A三個結構基因,分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙酰基轉移酶,此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調節 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白,後者與O序列結合,使操縱子(元)受阻遏而處於關閉狀態。在啟動序列P上遊還有一個分解(代謝)物基因激 活蛋白(CAP)結合位點。由P序列、O序列和CAP結合位點共同構成lac操縱子的調控區,三個酶的編碼基因即由同一調控區調節,實現基因產物的協調表 達 。
其次
在沒有乳糖存在時,lac操縱子(元)處於阻遏狀態。此時,I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結合,阻礙RNA聚合酶與P序列結 合,抑制轉錄起動。當有乳糖存在時,lac操縱子(元)即可被誘導。在這個操縱子(元)體系中,真正的誘導劑並非乳糖本身。乳糖進入細胞,經β-半乳糖苷酶催化,轉變為半乳糖。後者作為一種誘導劑分子結合阻遏蛋白,使蛋白構象變化,導致阻遏蛋白與O序列解離、發生轉錄。異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的作用與半乳糖相同,是一 種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。編輯本段使用方法 首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,並進行過濾除菌後保存。然後在100 ml的瓊脂培養基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養基。當DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然後轉化至lacZ缺失細胞中後,塗布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養基,可根據長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
作用 誘導外源基因的表達,普遍應用於原核表達系統,使其表達量增高,產物穩定,具有易鑒定,易純化的優點。
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