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寧波歐曼生物科技有限公司
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TPIG使用說明
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TPIG使用說明
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IPTG 使用說明
中文品名: 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)
英文名稱:
Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside
用途:異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。IPTG 常用於需要誘導 β-半乳糖苷酶活性的克隆實驗。它常與 X-Gal 或 Bluo-Gal 結合使用,用於重組細菌菌落的藍白篩選,這些菌落可以誘導 lac 操縱子在大腸桿菌中的表達。IPTG 與 lacI 阻遏蛋白結合並改變其構象而發揮作用,防止 β-半乳糖苷酶編碼基因 lacZ 的抑制。
使用方法:首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,並進行過濾除菌後保存。然後在100 ml的瓊脂培養基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養基。當DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然後轉化至lacZ缺失細胞中後,塗布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養基,可根據長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
配制方法:在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG後,用蒸餾水定容至10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存於-20℃。
優點:
1.能誘導酶的合成,但又不被分解的分子,稱為安慰誘導物。由於乳糖雖可誘導酶的合成,但又隨之分解,產生很多復雜的動力學問題,因此人們常用安慰誘導物來進行各種實驗。
2.IPTG不被菌體代謝,為乳糖類似物,一旦進入細胞就會產生持續長久的誘導效果,所以IPTG的誘導效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可達到理想誘導效果。由於IPTG不被代謝,在胞內專一誘導外源蛋白的表達。不受細胞代謝的影響,誘導效果持續穩定。乳糖有雙效作用,既能做為誘導劑異乳糖的前體物質,又可以做碳源,在誘導過程中,很不穩定,IPTG因其優異的穩定性決定了它適合做實驗研究用。
3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。
4.半乳糖苷鍵中用硫代替了氧,失去了水解活性,但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與酶位點的親和力相同,IPTG雖不為β–半乳糖苷酶所識別,但它是lac基因簇十分有效的誘導物。
註意事項:培養噬菌體時,Top agar中的添加量為:25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有
IPTG 的培養基4℃避光保存,須在1~2 周內使用。
保存:2-8°C冷藏保存,配制好後保存於-20°C,室溫可放置一個月。遠離熱源及氧化劑。
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