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寧波歐曼生物科技有限公司
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高效液相色譜所用基本概念
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高效液相色譜所用基本概念
高效液相色譜所用基本概念
高效液相色譜所用基本概念
保留值等色譜分析有關術語,以及分配系數、分配比、塔板高度、分離度、選擇性等方面均與氣相色譜相一致;高效液相色譜所用基本理論:塔板理論與速率理論也與氣相色譜一致。因液相色譜以液體代替氣相色譜中的氣體作流動相,則速率議程H=A+B/?+C?。式中:縱向擴散項(分子擴散項)B/?對板高的影響與氣相色譜不同,由於液相色譜中組分分子在流動相中的擴散系數Dm僅為氣相色譜中的萬分之一,因此縱向擴散項對板高的影響可以忽略不計。於是影響液相色譜的主要因素是傳質項Cu。由圖14—可知,氣相色譜(GC)的流動相流速u增大時,板高H顯著增大(即柱效顯著降低),而液相色譜(LC)的流速增大時,板高增大不顯著(即柱效降低不顯著)。這說明高效液相色譜也有很高的分離效能,此外,氣相色譜的載氣權數種,其性質差別也不大,對分離效果影響也不大。而液相色譜的載液種類多,性質差別也大,對分離效果影響顯著。因此流動相的選擇很重要,並且在選擇流動相對應註意以下幾點:流動相對樣品有適當的溶解度,但不與樣品發生化學反應,也不與固定液互溶;流動相的純度要高(至少分析純)、粘度要小,以免帶進雜質和組分在流動相中擴散系數下降;流動相應與所用檢測器相匹配,不應對組分檢測產生幹擾作用。高效液相色譜不但具有高效、高速、高靈敏度的特點,還由於它的流動相(載液)種類比氣相色譜的流動相(載氣)多,因此可選用兩種或多種不同比例的液體作流動相,從機時可提高選擇性。此外,液相色譜的餾分比氣相色譜易於收集。便於為紅外、核磁等方法確定化合物結構提供純樣品。由於高效液相色譜法具有以上特點,它適於分離、分析沸點高、熱穩定性差、分子量大(大於400)的氣相色譜法不能或不易分析的許多有機物和一些無機物,而這些物質占化合物總數的75~80%。因此它已廣泛用於核酸、蛋白質、氨基酸、維生素、糖類、脂類、甾類化合物、激素、生物堿、稠環芳烴、高聚物、金屬螯合物、金屬有機化合物以及多種無機鹽類的分離和分析。但是,高效液相色譜的固定相的分離效率、檢測器的檢測範圍以及靈敏度等方面,目前還不如氣相色譜法。此外對於氣體和易揮發物質的分析方面也遠不如氣相色譜法,因此高效液相色譜法和氣相色譜法配合使用可互相取長補短,相輔相成。
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