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IPTG異丙基β-D-硫代半乳糖苷CAS:367-93-1應用介紹以及生化樣品中含量的檢測
近年來,分子診斷成為IVD領域較為熱門的分支,其檢測對象主要為核酸和蛋白質,以核酸分子為主。在其所需要制備的生化樣品中,往往會有IPTG的身影。而IPTG價格昂貴,使用量過多時不僅有毒性,還會提高生產成本,所以制品中IPTG含量的檢測十分重要。本文將為大家總計 IPTG CAS:367-93-1的應用,並介紹一種新的檢測IPTG的方法。IPTG,中文名為異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷,是β–半乳糖苷酶的活性誘導物質。其具有如下作用:(1)挑選基因重組體:當pUC系列的載體DNA以lacZ缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體的載體DNA進行轉染時,如果在平板培養基中加入X–gal和IPTG,由於β–半乳糖苷酶的α–互補性,可以根據是否呈現白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體;(2)作為具有lac或tac等啟動子的表達載體的表達誘導物使用。IPTG作為一種分子生物學試劑,常用於藍白斑篩選及IPTG誘導的細菌內的蛋白表達等;基因工程技術中,采用IPTG作為誘導劑,可促進目的蛋白的大量表達。 其含量該如何檢測呢?IPTG實際上是一種半硫代的化合物,由於含硫的化合物分子中缺乏發光基團,無法采用常規的紫外-可見檢測器檢測,目前最常用的檢測方法是衍生化聯合熒光的HPLC檢測法檢測。但是這種檢測法費時費力,選擇性差。因此,開發一種IPTG含量的檢測方法,以實現對生化樣品中IPTG含量的準確測定,具有積極的現實意義。研究人員開發了一種IPTG含量的檢測方法,包括如下步驟:(1)前處理:超濾離心(超濾離心管中超濾管的孔徑範圍為0.001~0.02微米),得到分子量小於3000道爾頓的待測樣品;
(2)IPTG CAS:367-93-1標準曲線繪制:配制標準溶液,采用離子色譜-脈沖安培檢測法進行檢測。色譜柱為反相色譜柱;流動相為緩沖溶液(pH值為1~11)和有機溶劑的混合流動相(體積比為99~80:1~20),得到IPTG標準曲線;
(3)檢測待測樣品:離子色譜-脈沖安培檢測法,並對照標準曲線,得IPTG具體含量。
該方法采用超濾離心管進行處理樣品,快速高效去除體系中的雜質,將處理後的待測樣品溶液通過pH緩沖溶液與有機溶劑的混合流動相進入反相色譜柱進行分離,IPTG很快洗脫出來,再通過脈沖安培檢測器進行檢測,完成分析。樣品前處理簡便、專屬性好、靈敏度高,適於推廣應用。