IPTG(CAS 367-93-1)的應用以及生化樣品中含量的檢測

近年來，分子診斷成為IVD領域較為熱門的分支，其檢測對象主要為核酸和蛋白質，以核酸分子為主。在其所需要制備的生化樣品中，往往會有IPTG的身影。而IPTG價格昂貴，使用量過多時不僅有毒性，還會提高生產成本，所以制品中IPTG含量的檢測十分重要。本文將為大家總結IPTG的應用，並介紹一種新的檢測IPTG的方法。

        IPTG，中文名為異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，是β–半乳糖苷酶的活性誘導物質。其具有如下作用：

      （1）挑選基因重組體：當pUC系列的載體DNA以lacZ缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體的載體DNA進行轉染時，如果在平板培養基中加入X–gal和IPTG，由於β–半乳糖苷酶的α–互補性，可以根據是否呈現白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑選出基因重組體；
（2）作為具有lac或tac等啟動子的表達載體的表達誘導物使用。IPTG作為一種分子生物學試劑，常用於藍白斑篩選及IPTG誘導的細菌內的蛋白表達等；基因工程技術中，采用IPTG作為誘導劑，可促進目的蛋白的大量表達。

        其含量該如何檢測呢？IPTG實際上是一種半硫代的化合物，由於含硫的化合物分子中缺乏發光基團，無法采用常規的紫外-可見檢測器檢測，目前最常用的檢測方法是衍生化聯合熒光的HPLC檢測法檢測。但是這種檢測法費時費力，選擇性差。因此，開發一種IPTG含量的檢測方法，以實現對生化樣品中IPTG含量的準確測定，具有積極的現實意義。研究人員開發了一種IPTG含量的檢測方法，包括如下步驟：

（1）前處理：超濾離心（超濾離心管中超濾管的孔徑範圍為0.001~0.02微米），得到分子量小於3000道爾頓的待測樣品；
（2）IPTG標準曲線繪制：配制標準溶液，采用離子色譜-脈沖安培檢測法進行檢測。色譜柱為反相色譜柱；流動相為緩沖溶液（pH值為1~11）和有機溶劑的混合流動相（體積比為99~80：1~20），得到IPTG標準曲線；
（3）檢測待測樣品：離子色譜-脈沖安培檢測法，並對照標準曲線，得IPTG具體含量。

        該方法采用超濾離心管進行處理樣品，快速高效去除體系中的雜質，將處理後的待測樣品溶液通過pH緩沖溶液與有機溶劑的混合流動相進入反相色譜柱進行分離，IPTG很快洗脫出來，再通過脈沖安培檢測器進行檢測，完成分析。樣品前處理簡便、專屬性好、靈敏度高，適於推廣應用。