IPTG 異丙基β-D-硫代半乳糖苷 CAS:367-93-1

異丙基-beta-D-硫代半乳糖苷簡稱IPTG，是一種作用極強的誘導劑,因不被細菌代謝而十分穩定,所以被實驗室廣泛應用。

IPTG 常用於需要誘導beta-半乳糖苷酶活性的克隆實驗。它常與 X-Gal 或 Bluo-Gal 結合使用，用於重組細菌菌落的藍白篩選，這些菌落可以誘導 lac 操縱子在大腸桿菌中的表達。IPTG 與 lacI 阻遏蛋白結合並改變其構象而發揮作用，防止 β-半乳糖苷酶編碼基因 lacZ 的抑制。

IPTG 使用方法

首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液，並進行過濾除菌後保存。然後在100 ml的瓊脂 培養基中，加入100 mul的上述溶液、200 mul的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 &mul的Amp(100 mg/ml)，制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養基。當DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體)，然後轉化至lacZ缺失細胞中後，塗布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養基，可根據長出菌體的藍白色，而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。

IPTG 配制方法

在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG後，用蒸餾水定容至10ml，用0.22mum濾器 過濾除菌，分裝成1ml小份貯存於-20℃。

IPTG誘導劑優點

1. 能誘導酶的合成，但又不被分解的分子，稱為安慰誘導物。

由於乳糖雖可誘導酶的合成，但又隨之分解，產生很多復雜的動力學問題，因此人們常用安慰誘導物來進行各種實驗。

2.IPTG不被菌體代謝，為乳糖類似物，一旦進入細胞就會產生持續長久的誘導效果，所以IPTG的誘導效率高，往往只需要很少量(1mmol/L)即可達到理想誘導效果。由於IPTG不被代謝，在胞內專一誘導外源蛋白的表達。不受細胞代謝的影響，誘導效果持續穩定。乳糖有雙效作用，既能做為誘導劑異乳糖的前體物質，又可以做碳源，在誘導過程中，很不穩定，IPTG因其優異的穩定性決定了它適合做實驗研究用。

3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。

4.半乳糖苷鍵中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與酶位點的親和力相同，IPTG雖不為β–半乳糖苷酶所識別，但它是lac基因簇十分有效的誘導物。

IPTG 使用註意事項

培養噬菌體時，Top agar中的添加量為：25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有IPTG 的培養基4℃避光保存，須在1~2 周內使用。IPTG需要在 2-8°C冷藏保存，配制好後保存於-20°C，室溫可放置一個月，遠離熱源及氧化劑。